EVALUACIÓN DEL CONTENIDO DE AFLATOXINA M1 EN LECHE CRUDA Y PASTEURIZADA MEDIANTE HPLC-MS/MS

Resumo

Las micotoxinas son metabolitos tóxicos producidos por los hongos del género Aspergillus, de las especies flavus y parasiticus, siendo la más importante para la industria láctea la Aflatoxina M1. Estas pueden ocasionar problemas en la salud y desde el punto de vista comercial constituyen una barrera para-arancelaria en las exportaciones. El objetivo de este proyecto fue validar dos metodologías para la determinación de aflatoxina M1 en leche cruda y pasteurizada mediante HPLC-MS/MS usando como referencia las metodologías QuEChERS ampliamente usada para el análisis de contaminantes traza en alimentos y el método oficial propuesto por la AOAC 2000.08 el cual reporta el uso de Extracción en Fase Sólida (SPE) mediante columnas de inmunoafinidad. Las metodologías evaluadas fueron: 1. QuEChERS el cual se basó en un método previamente desarrollado por nuestro grupo de trabajo para la determinación de pesticidas y drogas veterinarias en leche cruda. Consta de una etapa de extracción con acetonitrilo (ACN) y posterior salting-out de la muestra, seguido de una etapa de clean up dispersivo en fase sólida para remover las posibles interferencias de la matriz. Finalmente el extracto obtenido se analiza mediante HPLC-MS/MS. 2. SPE mediante columnas de C-18, como sustituto de las de inmunoafinidad reportadas por el método AOAC 2000.08. En dicho método la leche previamente desgrasada se pasa por el cartucho, inicialmente acondicionado. Finalmente la aflatoxina M1 se eluye con un solvente orgánico apropiado. Las cifras de mérito evaluadas para la validación de la metodología; veracidad, precisión, límites de detección y cuantificación, linealidad y efecto matriz fueron determinadas de acuerdo a la normativa de la Unión Europea, el documento SANTE/11945/2015. Los resultados obtenidos para veracidad y precisión intermedia correspondiente a ambos métodos, donde los %Rec y %RSD en QuEChERS para los niveles de 0,05 y 0,1 µg/kg y para el nivel de 0,05 µg/kg en SPE cumplen con el criterio de la guía SANTE. Si bien para el nivel de 0,5 µg/kg en QuEChERS y 0,1 µg/kg en SPE, no llegan al 70% en la recuperación según la guía es aceptable para el análisis de rutina. La aplicabilidad de las metodologías se evaluó mediante el análisis demuestras comerciales de leche pasteurizada, entera y descremada con el fin de verificar el cumplimiento de los límites máximos para aflatoxina M1, establecidos por el Codex Alimentarius y la Unión Europea. No se detectó aflatoxina M1 en las muestras analizadas. Se logró desarrollar dos metodologías para la detección de aflatoxina M1 en leche a los niveles que exigen los organismos oficiales. Dichos métodos cosntituyen una alternativa más aconómica que el método oficial de la AOAC. Dichas metodologías se validaron según el documento SANTE /11945/2015 cumpliendo con los parámetros establecidos para las cifras de mérito.