INFLUÊNCIA DO INIBIDOR DA ACIL-COA SINTETASE DE CADEIA LONGA EM EMBRIÕES IN VITRO

Resumo

A produção in vitro de embriões (PIVE) envolve as etapas de colheita, maturação in vitro (MIV) e fecundação in vitro (FIV) de oócitos, bem como cultivo in vitro (CIV) de embriões .Segundo os dados da Sociedade Internacional de Transferência de Embriões, o Brasil se destaca como o maior produtor in vitro de embriões bovinos. No entanto, um grande obstáculo para a disseminação desta tecnologia é a grande sensibilidade dos embriões produzidos in vitro à criopreservação. Essa redução na criotolerância está frequentemente associada com o acúmulo lipídico no citoplasma das células embrionárias. Uma proposta para esse entrave é manipular a quantidade lipídica embrionária. A Acil-CoA sintetase (ACS) é uma enzima catalizadora da da etapa inicial do metabolismo de ácidos graxos de cadeia longa. A modulação da ACS pode bloquear todo o metabolismo de ácidos graxos, síntese de lipídios e biomembranas. Ainda não há relatos com o uso dessa molécula na modulação lipídica embrionária. Investigar a influência da suplementação do triacsin C sobre o desenvolvimento e conteúdo lipídico embrionário é o objetivo do presente trabalho. O experimento foi realizado com oócitos aspirados de ovários originados de abatedouro. Os oócitos recuperados (n= 308) com citoplasma homogêneo contendo mais que três camadas de células do cumulus foram lavados em PBS+SFB (soro fetal bovino) e maturados in vitro em meio TCM 199. Após as 24 horas de MIV, foi praticado o protocolo de FIV. A CIV ocorreu 18 horas após a FIV, onde as estruturas embrionárias foram desnudadas e cultivadas no meio SOFaaci suplementado com 2,5% de SFB e 5 mg/mL de BSA, até o dia 10. No dia 3 de cultivo, foram observadas as taxas de clivagem dos zigotos. No dia 4 de cultivo (96 horas após a FIV), os zigotos foram divididos aleatoriamente em dois grupos: 1) Grupo Controle (placebo): meio suplementado com 2,5 µL de PBS; 2) Grupo Tratado: meio suplementado com 2,5 µL de Triacsin C (dose 1µM), inibidor da ACS. Blastocistos expandido oriundos do grupo Controle (n= 27) e Tratado (n= 23) foram coletados no dia 7 e dia 8, após a FIV e submetidos à coloração de Sudan Black B, a fim de possibilitar a quantificação lipídica. Fotos de microscopia foram capturadas para realizar a quantificação lipídica no programa ImageJ pelo método color segmentation. Para análise estatística, foi realizado ANOVA seguido do teste Tukey com o auxílio do software GraphPad Prisma 5.0. Como resultado, o conteúdo lipídico citoplasmático observado no grupo Controle (16,2% ± 1,4) foi superior (P<0.05) quando comparado ao grupo Tratado (11,8 ± 0,7). A redução do conteúdo lipídico observada no grupo tratado sustenta a efetividade da inibição da Acil-CoA sintetase de cadeia longa (ACS) e consequente não ativação de ácidos graxos de cadeia longa para gerar Acil-CoA, diminuindo assim o metabolismo de lipídeos, como descrito anteriormente por Zhang, et al. (2011) em embriões e Drosófila.Portanto, a droga Triacsin C, inibidor da ACS, reduziu o conteúdo lipídico citoplasmático de embriões produzidos in vitro, sendo uma possível estratégia na criopreservação.