AVALIAÇÃO DO POTENCIAL ANTIMICROBIANO DE BACTERIOCINA PURIFICADA POR ULTRAFILTRAÇÃO.

Resumo

Dentro dos estudos da microbiologia, encontram-se os micro-organismos indesejáveis que causam danos à saúde do consumidor por contaminação alimentar, como Staphylococcus aureus e Escherichia coli. As Bactérias ácido-láticas são gram-positivas, catalase negativas, não formadores de esporos que promovem a segurança de produtos. Como exemplo temos a Lactobacillus sakei que possui alto potencial de produção de peptídeos e são ativas contra o desenvolvimento de patógenos. A finalidade da pesquisa foi testar a ação da Lactobacillus sakei sob Escherichia coli e Staphylococcus aureus contribuindo para o desenvolvimento de um novo produto que aumente a vida útil de prateleira. Foi utilizada cepa de Lactobacillus sakei previamente isolada, pelo grupo de pesquisa, de salame italiano e inoculada em MRS à 35ºC durante 24h. O extrato foi vertido em tubos de Falcon e centrifugado a 5.000RPM em temperatura de 4ºC por 30min com intervalo de 15min para troca destes tubos. Após, foi vertido em tubos de ultrafiltração Vivaspin e submetido a uma nova centrifugação com tubos de 3.000 e 5.000MWCO durante 30min. Escherichia coli e Staphylococcus aureus foram inoculados 2h antes do teste em caldo BHI. O teste foi realizado em microplacas nas linhas A (com extrato), B (sem extrato) e C (controle). Linha A: 145µL de caldo Mueller Hinton, 135µL do extrato e 20µL da microbiota. Linha B: 145µL de caldo Mueller Hinton, 135µL de MRS e 20µL da microbiota. Linha C: 145µL de caldo Mueller Hinton, 135µL do extrato e 20µL de BHI. Nas duas primeiras microplacas foram utilizados Escherichia coli com o extrato purificado e membranas de 3.000MWCO, cada uma com o extrato filtrado e outra com o retido e da mesma forma, as outras duas com Staphylococcus aureus com o extrato purificado e 5.000MWCO também com o extrato filtrado e outra com o retido. As microplacas foram lidas para o tempo zero e incubadas a 35ºC durante 16h, assim, foram lidas novamente e os resultados anotados. Os cálculos foram: A média dos valores no tempo 0h e do tempo de 16h. A alteração não realizada pelo micro-organismo é esta média de 16h menos a de 0h. Para o percentual de crescimento microbiano: ((média do resultado com extrato em 16h média do resultado com extrato em 0h) alteração não realizada pelo micro-organismo) / (média do resultado sem extrato em 16h média do resultado sem extrato em 0h). O percentual de inibição é calculado diminuindo este percentual de crescimento por 100. Os resultados alcançados foram de 99,98% de inibição de Escherichia coli com a membrana de 3.000MWCO e extrato retido e com o extrato filtrado, 99,99%. Para Staphylococcus aureus houve 99,96% de inibição utilizando o extrato retido com membrana de 5.000MWCO e com o extrato filtrado resultou em 100,00%. A pesquisa comprovou a eficiência da inibição de agentes patogênicos e a possibilidade de aplicação de Lactobacillus sakei em um novo produto com maior vida útil de prateleira.