A GENÔMICA PLASTIDIAL COMO FERRAMENTA PARA CARACTERIZAÇÃO FORENSE E ESTUDOS EVOLUTIVOS EM CANNABIS SP.

Resumo

Cannabis sp. é um dos gêneros de plantas domesticadas mais antigo da história, com registros datando da Idade do Bronze. A espécie é considerada a droga ilícita mais consumida a nível mundial, tornando essa planta ilegal na maioria dos países e, apresentando muitas variedades e hibridizações que visam ressaltar seus efeitos entorpecentes, medicinais e industriais. O uso do DNA aumentou em diferentes áreas das ciências forenses, como a investigação de espécies vegetais, onde o DNA plastidal tem sido utilizado para elucidar e gerar evidências em casos de rastreabilidade de plantas geneticamente modificadas e controladas, sendo assim a pergunta se o genoma plastidial poderia ser utilizado para caracterização forense de apreensões de maconha pela Polícia Federal foi a norteadora deste trabalho. O objetivo deste trabalho foi comparar variedades de Cannabis sp. cultivadas e/ou apreendidas no Brasil, a fim de identificar variações nas regiões plastidiais, abastecendo um banco de dados com informações para caracterizar as plantas apreendidas. Foram realizados sequenciamentos de DNAs plastidiais de duas variedades de Cannabis apreendidas pela Polícia Federal utilizando tecnologia de sequenciamento de nova geração (NGS). Esses genomas foram caracterizados e montados utilizando o CLC Genomics software (Qiagen, Hilden, Germany), anotados na plataforma GeSeq e visualizados no programa OGDraw. As análises de RNAs e a comparação das anotações foram realizadas no software tRNAscan-SE v.2.0. O mapa do genoma circular foi obtido utilizando o programa OGDraw. Os genomas plastidiais foram alinhados juntamente com outros genomas do gênero Cannabis depositados na plataforma NCBI e o genoma da espécie Humulus lupulus L. foi utilizada como grupo externo. Foi realizada uma análise de Dot-plot do alinhamento para verificar a consistência do mesmo e a análise filogenética foi realizada no software Mega 6.0 utilizando o modelo evolutivo GTR com distribuição Gamma. Essa análise foi feita utilizando o método de máxima verossimilhança com um bootstrap de 1000 réplicas. Nessas análises, a variedade Cannabis sativa Brazuka, se mostrou diretamente relacionada a outras variedades da espécie com genomas plastidiais publicados. Porém, a variedade Cannabis AK Royal Automatic, uma planta híbrida originária do cruzamento das três espécies conhecidas para o gênero Cannabis (C. sativa x C. indica x C. ruderalis) apresentou significativas diferenças quando comparada com as demais variedades. Com base nos dados obtidos neste trabalho, demonstramos que análises forenses utilizando plastomas é uma potencial ferramenta para a identificação de variedades híbridas de Cannabis sp. Os dados obtidos neste trabalho irão alimentar um banco de dados do INCT-FORENSE, contribuindo no trabalho de identificação das apreensões e na caracterização das amostras de Cannabis