AVALIAÇÃO IN VITRO DA CAPACIDADE FECUNDANTE DE ESPERMATOZOIDES OVINOS CRIOPRESERVADOS SEM PLASMA SEMINAL

Resumo

A remoção do plasma seminal durante o processo de criopreservação do sêmen é uma prática de rotina em algumas espécies. Os espermatozoides ovinos são sensíveis ao congelamento e a remoção do plasma seminal parece ser uma alternativa para melhorar a qualidade do sêmen congelado. Nosso objetivo foi avaliar a capacidade fecundante dos espermatozoides criopreservados após a retirada do plasma seminal. O sêmen foi coletado de quatro carneiros pelo método de vagina artificial. As amostras foram analisadas de maneira subjetiva quanto a cinética. Um pool foi formado com o sêmen dos quatro carneiros e dividido em três grupos, sendo eles: Grupo Controle (GC), onde o sêmen foi congelado de forma convencional, Grupo Tratamento (GT) no qual o sêmen foi centrifugado a 4000xg para a retirada do plasma e posteriormente congelado e Controle Negativo (CN) em que o sêmen foi centrifugado mas não teve seu plasma retirado. As palhetas de sêmen de 0,25mL foram envasadas com concentração final de 400x106 espermatozoide/mL com diluente Optixcell (IMV, França), refrigeradas a 5ºC por 2 horas e expostas ao vapor de nitrogênio líquido por 15 minutos, após foram armazenadas a -196ºC em botijão criogênico. Os ovários ovinos provenientes de abatedouros foram transportados em solução fisiológica em temperatura próxima a 36 graus. No laboratório folículos de 3 a 5 mm foram aspirados e os CCO com ooplasma homogêneo e células do cumulus intactas foram selecionados e divididos aleatoriamente em três grupos (GC, GT e CN). Os oócitos foram maturados por 24 horas e fertilizados com o sêmen de acordo com o respectivo grupo. A avaliação da fecundação ocorreu 18 horas após a fertilização dos oócitos utilizando sonda Hoechst 33342 sob microscopia de fluorescência. A fecundação total considerou os oócitos com espermatozoide penetrado ou formação do segundo pró núcleo. Também foram quantificadas as polispermias. Os dados foram analisados pelo teste de Friedman e Wilcoxon com nível de significância de 5%. As taxas de penetrados foram de 18,11 ± 4,09; 16,27 ±4,58; 16,41 ±5,27 e de fertilização 30,49 ± 3,64; 31,38 ± 3,77; 24,68 ± 3,57, taxas de polispermia 0,60 ± 0,59; 0,66 ± 0,66; 1,14 ± 1,13 para os grupos GC, GT e CN, respectivamente. Os tratamentos não apresentaram diferença estatística e os resultados são compatíveis aos encontrados na literatura. Com isso, concluiu-se que a remoção do plasma seminal não interfere positivamente nas taxas de fertilização in vitro na espécie ovina.