DETERMINAÇÃO DO INFLUXO CELULAR DE ZINCO EM LEUCÓCITOS HUMANOS: CINÉTICA DE ORDEM ZERO

Resumo

O zinco é um elemento muito importante para as células humanas estando envolvido no desenvolvimento, diferenciação e proliferação celular, atuando também como modulador no crescimento da mesma. Este metal está bem distribuído na célula, sendo encontrado no núcleo, citosol e associado a membranas. Existem dois grupos de proteínas que regulam o influxo e efluxo de Zn do citosol para mediar a homeostase celular. Um dos desafios no estudo toxicológico de Zn é conhecer a quantidade capaz de entrar para o citoplasma da célula exposta a esse metal. Além disso, é importante saber se a entrada na célula ocorre em percentual constante ou variável, proporcional ou não à concentração de exposição celular. O trabalho teve como objetivo a determinação de níveis de Zn intracelular antes e após a exposição a fim de compreender a entrada cinética de Zn em leucócitos humanos sob condições experimentais controladas. Para quantificar o teor de Zn intracelular foram analisadas seis repetições usando a seguinte estratégia de triagem: (1) Controle negativo - suspensão de leucócitos ajustado (LS) (104 células/mm cúbico) em pH 7,4 tampão PBS; (2) controle positivo - LS mais Peróxido de Hidrogênio 4 mM; testes - composto de LS com 18,5 µM (2,5 µg/mL) ou 37,0 µM (5,0 µg/mL) ou 73,0 µM (10 µg/mL) ou 110 µM (15 µg/mL) ou 147 µM (20 µg/mL) de Zn (Cloreto de Zinco, grau analítico, Merck®, Darmstadt, Alemanha). Todos os grupos de amostras foram incubadas durante 1 hora a 25ºC com agitação lenta e o sentido foi invertido a cada 10 min na sequência as amostras foram adicionalmente lavadas cinco vezes com tampão de PBS pH 7,4 e centrifugada a 2.000 rpm durante 10 min. à temperatura ambiente. A quantificação de Zn intracelular nos leucócitos foi realizada usando a análise de ICP-MS. O teor de Zn intracelular foi calculado, considerando-se o número de 104 células/mm cúbico de LS, tendo em conta a concentração de Zn de que as células foram expostas e o valor determinado por análise de ICP-MS para a mesma, o que foi assumido como o conteúdo de Zn absorvido pelas células. Os dados obtidos foram tratados por análise unidirecional da variância (ANOVA), seguido de comparação múltipla pelo teste de Tukey, quando pertinente, aceitando p <0,05. Nossos resultados demonstram que há um aumento do conteúdo intracelular de Zn de forma proporcional à exposição celular, contudo, o percentual de Zn intracelular decai à medida que se aumenta a concentração de exposição, atingindo estabilização nas três últimas maiores concentrações. O aumento absoluto de concentração de Zn relacionado com o aumento da concentração intracelular de exposição do metal, sugere que o influxo do metal ocorre sob cinética de ordem zero.