INVESTIGAÇÃO DA PRESENÇA DO GENE ERM EM STAPHYLOCOCCUS COAGULASE NEGATIVA ISOLADOS DE BOLSAS DE CONCENTRADOS PLAQUETÁRIOS E COMPARAÇÃO DE METODOLOGIAS

Resumo

Os concentrados plaquetários (CPs) são hemocomponentes amplamente utilizados em pacientes com neoplasias e em tratamento quimioterápico. Porém, são os componentes sanguíneos que apresentam a maior taxa de contaminação bacteriana. Os Staphylococcus coagulase negativa (SCoN) têm emergido como importantes patógenos hospitalares, especialmente em pacientes imunocomprometidos, devido a sua facilidade em adquirir genes de resistência aos antimicrobianos. A resistência aos agentes macrolídeos, lincosamidas e estreptrogramínas B (MLSB) pode ser constitutiva ou induzível. A constitutiva é detectada no antibiograma normal e a induzível pode ser realizada pelo chamado Teste D. Essa resistência é ocasionada, predominantemente, pela modificação do alvo, mediada pelos genes ermABC. O objetivo desse estudo foi avaliar isolados bacterianos de CPs, provenientes do Hemocentro do Estado do Rio Grande do Sul de Santa Maria, a fim de investigar a resistência MLSB, através de metodologias fenotípicas e genotípicas. Foram analisados 16 isolados e 2 cepas controle: positivo Staphylococcus aureus ATCC BAA977 e negativo, Staphylococcus aureus ATCC BAA976. Os isolados foram submetidos aos testes de identificação fenotípica através do Vitek® 2 (bioMérieux, Marcy LE`toile, France) e os testes de sensibilidade frente aos antimicrobianos por difusão do disco (DD) e por Vitek® 2. A análise fenotípica e genotípica dos genes de resistência foram realizadas por Teste D e pela pesquisa dos genes ermABC pela Reação da Cadeia de Polimerase (PCR). Todos os isolados bacterianos foram caracterizadas como SCoN, sendo Staphylococcus haemolyticus (31,25%) a espécie prevalente. Através do método DD uma amostra apresentou perfil altamente resistente frente aos antimicrobianos testados, sendo sensível somente à linezolida. No entanto, pela automação apresentou resistência apenas frente à benzilpenicilina, clindamicina e eritromicina. Todos os isolados apresentaram resistência à penicilina e a benzilpenicilina. Através da DD, 62,5% dos isolados apresentaram resistência a clindamicina e a eritromicina e 31,25% e 43,75% pela automação, respectivamente. A análise fenotípica convencional da resistência foi efetuada com o Teste D, sendo positiva em seis amostras (37,5%), caracterizando o fenótipo induzível iMLSB. Duas (12,5%) apresentaram o fenótipo constitutivo cMLSB, já o fenótipo MSB não foi detectado. Através da automação, foi detectado 31,25% de iMLSB e 6,25% de MSB. Fenotipicamente analisando a técnica de DD nenhuma amostra apresentou o mecanismo de efluxo, fenótipo MSB, codificado pelo gene mrsA, que confere resistência apenas aos macrolídeos. No entanto pelo Vitek® 2, uma das amostras apresentou esse fenótipo. Analisando os resultados obtidos pela PCR, em cinco amostras (31,25%) foi evidenciada a presença do gene erm. O ermA foi relatado em 6,25% e o ermC em 25%, não foi constatado o gene ermB. A discrepância entre os resultados apresentados pelos diferentes métodos, isto é, a presença da inibição na DD e a ausência do gene na PCR, pode ser justificada pela presença de outro gene, o ermY, que não foi alvo dessa pesquisa, no entanto, existem relatos em Staphylococcus spp.. Outro motivo pelo qual cepas com fenótipo iMLSB não sejam portadoras do gene erm ainda não está claro, bem como, especula-se que haja possíveis mutações nos locais-alvos dos primers para esses genes.