Efeito Citotóxico in vitro do Manganês em Células Leucocitárias Humanas

Resumo

Introdução: O Manganês é um micronutriente essencial que participa de vários processos fisiológicos tanto em vegetais como em animais. Em mamíferos é um elemento essencial para formação dos ossos, função reprodutiva, metabolismo de carboidratos e lipídeos; além de desempenhar um papel importante como antioxidante. Porém, o Mn advindo tanto pela via oral como por inalação, em concentrações tóxicas, provoca distúrbios no sistema nervoso central causado pelo manganismo. Objetivo: Este estudo tem por objetivo avaliar o possível dano celular causado pelo Mn a células leucocitárias humanas, através do teste de viabilidade celular. Metodologia: Para avaliação da citotoxicidade do Mn foi utilizado o teste de viabilidade celular, através da perda da integridade da membrana dos leucócitos humanos de sangue total, utilizando o método do Azul de Tripam. (BUROW, et al., 1998). As amostras foram processadas em triplicata, obedecendo a divisão de grupos: Controle negativo (CN), composto da suspensão leucocitária (SL) (104 cel/mm3) em tampão PBS, pH 7,4 e temperatura de ambiente 25°C; Controle positivo (CP), composto da SL acrescidos de H2O2 4 mM; Testes, compostos da SL acrescidos das concentrações 5,0 µg/mL, 10 µg/mL, 15 µg/mL, 20 µg/mL e 25 µg/mL de Mn, previamente estabelecidas. Todos os grupos foram incubados por 1 hora, sob agitação lenta de inversão a cada 10 minutos. Após este período, foi realizado o teste supracitado. Todo material utilizado para os ensaios in vitro era novo e descartável, de forma a evitar contaminação adicional de Mn. No caso das vidrarias, as mesmas foram previamente tratadas com imersão em solução de HNO3 20% (v/v) por 24 h e, posteriormente, lavadas com água deionizada. Os dados foram analisados estatisticamente pela análise de variância de uma via e complementados pelo teste de Bonferroni, admitindo p < 0,05. Resultados e discussão: A avaliação da viabilidade celular demonstrou não haver diferença entre o número de células inviáveis entre o CN e as concentrações de 5,0 µg/mL e 10 µg/mL. Contudo, as concentrações restantes (15 e 20 µg/mL, p < 0,001) apresentaram um número crescente e maior de células inviáveis, sendo que a concentração de 25 µg/mL (p < 0,001) não diferiu do número de célula inviáveis encontradas no CP. Conclusão: A citotoxicidade do Mn sobre os leucócitos humanos, nas condições experimentais testadas, apresentaram um efeito dose-dependente a partir de 15 µg/mL e um elevado nível de dano para a concentração de 25 µg/mL.