Possíveis mecanismos para estabelecimento de cultura celular de Apis mellifera ( Linnaeus 1758)

Resumo

A chamada Colony Collapse Disorder (CCD) tem chamado atenção nos últimos anos devido as grandes perdas no número de colmeias de Apis mellifera ao redor do mundo. Diversos fatores são apontados como causadores da CCD: infecções virais, fungos, bactérias, ácaros, o uso de pesticidas, perda de diversidade genética e a perda de habitats. Linhagens celulares desenvolvidas, isoladas e cultivadas in vitro vem sendo amplamente utilizadas em estudos bioquímicos, genéticos, médicos, farmacológicos, dentre outros. Diversas linhagens celulares oriundas de insetos vem sendo desenvolvidas ao longo dos anos porém, há poucos relados de estabelecimentos eficientes de células oriundas de abelhas, apesar de tamanha importância econômica e ecológica deste inseto. Métodos para se estabelecer uma linhagem em cultura podem ser muitos, desde o estabelecimento de culturas primárias e seleção das que melhor se desenvolvem, suplementação de meios, mutação induzidas por gentes mutagênicos e expressão de oncogenes. Estes oncogenes são responsáveis por alterações na maquinaria celular, fazendo com que muitos dos resultados de sua expressão seja a proliferação celular descontrolada, levando a formação de tumores. Estas células tumorais, devido a sua capacidade de divisões tidas como infinitas, são chamadas de imortalizadas. A maioria da metodologia utilizada para estabelecimento de linhagens para A. mellifera baseia-se na modificação de meios para cultura pré-existentes para insetos e apenas uma relata a transdução e expressão de oncogenes, no caso o c-Myc humano. Destes poucos relatos, somente uma minoria conseguiu manter linhagens sob cultivo por longos períodos, cerca de 3 meses. Nosso grupo está engajado na busca de novos métodos para estabelecimento eficiente de linhagens celulares de abelhas in vitro. Três metodologias estão visadas para tal: a transdução de um oncogene para a proteína Ras em A. mellifera; proteína esta responsável pela sinalização de vias que levam a ativação de fatores transcricionais responsáveis pela sobrevivência, proliferação e diferenciação celular; a clonagem do gene para a porção proteica da Telomerase de A. mellifera, e transdução com promotores que possibilitem uma expressão constitutiva; isso faria com que os telômeros fossem mantidos nas extremidades dos cromossomos, permitindo estabilidade para sucessivos ciclos de divisão celular; e também a modificação de meios pré-existentes para culturas com a adição de mel e de geleia real, substituindo o soro fetal bovino, sendo ambos os produtos oriundos da própria colmeia e ricos em nutrientes, que suprem grande parte da dieta de embriões durante o desenvolvimento. Com o uso desta metodologia, pretende-se estabelecer eficientemente uma cultura celular de A. mellifera que permita sua manutenção por longos períodos de tempo, possibilitando estudos aprofundados sobre patógenos, agentes químicos e genéticos, que ajudariam na busca por soluções para a CCD.