Estimativa de Quantificação de DNA de Eragrostis plana Nees (Poaceae) Como Planta Padrão Para Citometria de Fluxo.

Resumo

A Eragrostis plana Nees é uma espécie de gramínea nativa da África. Conhecida como capim Annoni, foi introduzida juntamente com outra semente de espécie de forrageira no sul do Brasil. Esta apresenta potencial de invasora quando associada ao pastejo intenso, assim tem degradados grandes extensões de pastagem nativa. A situação se agrava com remoção ou redução da cobertura vegetal. Deste modo, a espécie é facilmente encontrada na cidade e no campo. Na espécie, não existem estudos sobre presença de polifenóis, nas folhas; o que facilita no isolamento e na coloração de núcleos para estimativa de quantificação de DNA para citometria de fluxo. O presente trabalho visou à obtenção da estimativa de quantificação de DNA e testar a possibilidade de utilização da Eragrostis plana como planta referência interna para a Citometria Vegetal. Três indivíduos adultos foram utilizados na coleta para análise; três amostras foliares jovens de cada indivíduo foram analisadas por citometria de fluxo. Para a quantificação do conteúdo de DNA foram utilizadas 50 mg de tecido foliar jovem de cada amostra e 50 mg de tecido foliar de Glycine max (padrão interno de referência). Os tecidos foliares foram triturados em placa de Petri, contendo 01mL de tampão Otto I gelado (tampão de lise). O material foi filtrado através de filtros de malha de 50 µm e 100 µm e posteriormente centrifugado a 600 RPM durante 10 minutos. O sobrenadante foi removido, deixando-se 100 µL da solução. Ao pellet, contando os núcleos, foi adicionado 100 µL de tampão Otto 2 . Este material da suspensão nuclear foi corado com 05 µg/mL de iodeto de propídeo durante 10 minutos. Para amostras foram analisados 10.000 núcleos. Os histogramas obtidos apresentaram CV inferior a 5% e apresentou estimativa da quantificação de DNA com IP de 1,24 ± 0,02 pg para 2C e 1,213 a 1,259 x 10 9 pares de bases (Dolezël et al. 2003) . Segundo Johnston et al. (1999) consideram ser um passo crítico, a escolha do padrão vegetal a utilizar; esta deve ter conteúdo em DNA próximo da planta analisada. Loureiro e colaboradores (2007) analisaram duas novas soluções de isolamento de núcleos em 37 espécies utilizadas de diversas famílias, porém não houve exemplares da Poaceae. A utilização dos padrões vegetais sugeridos por Doleel et al. (1992) é pouco para cobrir a diversa gama de genomas da flora brasileira. O resultado possibilita a utilização de uma nova planta padrão, de fácil disponibilidade, baixo CV e sem restrição de metábolitos secundários para a citometria de fluxo em vegetais no Centro Interdisciplinar de Pesquisas em Biotecnologia.