Análise da expressão gênica do gene CYP19a em tilápia (Oreochromis niloticus)

Resumo

A tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) é o segundo peixe com maior índice de produção no mundo, se adaptando bem a diversos ambientes. Para fins comerciais, é desejável indivíduos machos, por direcionarem a energia para o crescimento, resultando em peixes de maior tamanho. Atualmente, para a obtenção de predominância deste gênero, é utilizado hormônios. No entanto, o mercado consumidor, bem como as indústrias questionam o uso de hormônios, principalmente quanto à segurança destes para a saúde humana e ao meio ambiente. Como alternativa, pesquisas foram desenvolvidas e o método de reversão sexual através da temperatura demonstrou alterar a expressão de genes participantes da cascata genômica, envolvendo o gene chave do processo, CYP19a, e seus fatores de transcrição. O produto deste gene é a principal enzima chamada aromatase ovariana, responsável pela conversão do androgênio em estrogênio, resultando em um indivíduo fêmea. O presente trabalho visa estudar os perfis de expressão de CYP19a utilizando a técnica de reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR), em duas linhagens de tilápia melhoradas geneticamente pela piscicultura Aquabel as quais são denominadas Premium Aquabel e Supreme Aquabel, nas temperaturas de 25 ºC e 35 ºC utilizadas na reversão sexual. Para a realização do experimento, será utilizado amostras de cDNA de tilápias revertidas pelo Laboratório de Engenharia Genética Animal (LEGA) da Universidade Federal de Pelotas (UFPel). Para fins de análises, as amostras serão amplificadas para o gene CYP19a, utilizando-se como gene de referência, a β-actina. Os dados serão analisados pelo método relativo, a partir do 2-ΔΔCt. Os dados serão analisados estatisticamente, principalmente quanto à variância, pelo ANOVA e teste de Tukey. Com o presente trabalho, espera-se a identificação dos padrões de expressão da enzima aromatase ovariana nas duas linhagens em estudo, além da comparação das diferenças de expressão entre as temperaturas e as linhagens. A partir dos dados obtidos neste trabalho e paralelo aos dados obtidos em outros trabalhos para outros genes envolvidos no processo, será possível a montagem de um modelo de estudos visando compreender melhor a cascata gênomica, principalmente quanto à sua regulação, especulando-se com base nos dados estatísticos, quais os genes de acordo com a sua expressão, podem ter maior influência pela temperatura no processo de ativação e inativação da enzima aromatase ovariana, visando otimizar o processo de reversão sexual por temperatura.