Produção e Avaliação de Anticorpos Policlonais para Vírus Bovinos

Resumo

No Brasil, diversos agentes virais foram descritos causando infeccoes em rebanhos bovinos gerando perdas economicas significativas. A confirmacao da infeccao viral em um animal requer a demonstracao do agente ou da resposta imune. Os imunoensaios sao testes utilizados na rotina laboratorial para deteccao de antigenos virais e necessitam de anticorpos especificos. Assim sendo, o objetivo do presente estudo foi produzir anticorpos policlonais para alguns virus bovinos, e avaliar a reatividade destes em testes de imunofluorescencia, imunoperoxidase e slot blot. Para isto, cepas e/ou isolados do herpesvirus bovino tipo 1 (BoHV-1), herpesvirus bovino tipo 2 (BoHV-2), herpesvirus bovino tipo 5 (BoHV-5), herpesvirus bovino tipo 5 gE deletado (BoHV-5 gE¢), virus da diarreia viral bovina (BVDV), virus respiratorio sincicial bovino (BRSV), virus da lingua azul (BTV), e virus da vaccinia (VACV) foram amplificados individualmente em cultivo celular e o sobrenadante foi utilizado para imunizar coelhos. O sobrenadante de cultivos infectados com VACV e patogenico para coelhos, por isso, foi previamente inativado e homogeneizado com adjuvante hidroxido de aluminio (20%). Os animais foram imunizados cinco vezes pela via subcutanea, com intervalos de 14-21 dias entre as imunizacoes, e cinco dias apos a ultima dose coletou-se sangue. O antissoro foi obtido por centrifugacao do sangue, aliquotado e armazenado a -20C ate o momento dos testes. Durante o periodo das imunizacoes nao foram observados sinais clinicos ou reacoes adversas nos animais. Apos o processamento do sangue, obteve-se em media 15 mL de soro hiperimune de cada animal. Estes foram empregados como anticorpo primario em testes de imunofluorescencia, imunoperoxidase e slot blot frente a celulas infectadas com virus homologos. A determinação da diluição de trabalho foi realizada pela avaliação de diversas diluições (1:100 a 1:204.800) dos antissoros nos três ensaios, sendo considerada a diluição de trabalho como a maior diluição capaz de reagir especificamente. As diluicoes de trabalho estabelecidas variaram entre 1:800 e 1:51.200 de acordo com o ensaio, sendo que, de modo geral foram superiores na imunoperoxidase quando comparadas com a imunofluorescência e slot blot. Diluições inferiores a 1:800 apresentaram reações inespecíficas, mesmo quando testadas frente a células não infectadas. Ainda, os antissoros anti-BoHV-1, -BoHV-5, -BVDV e -BRSV reagiram positivamente em ensaios de imunofluorescência e imunoperoxidase contra isolados heterólogos. Conclui-se que os antissoros produzidos em coelhos possuem elevadas concentrações de anticorpos específicos para os vírus, o que foi demonstrado pela reatividade nos ensaios de imunofluorescência, imunoperoxidase e slot blot. Desta forma, constituem uma importante ferramenta para detecção e caracterização de vírus bovinos na rotina de diagnóstico e/ou pesquisa nos ensaios testados.