Perfil de ácidos graxos de leveduras silvestres isoladas a partir de amostras ambientais

Resumo

Levando-se em consideração a enorme quantidade de glicerina gerada na produção de biodiesel e seu baixo custo, torna-se necessário encontrar alternativas para converter este substrato em produtos de alto valor agregado. Neste contexto, a glicerina vem sendo utilizada com sucesso como fonte de carbono por micro-organismos na produção de lipídios. O trabalho teve como objetivo utilizar a glicerina residual, gerada como coproduto da produção de biodiesel, para o cultivo de leveduras silvestres, visando produzir biomassa com elevado teor de lipídios e perfil de ácidos graxos diferenciado. Foram coletadas amostras de solos, flores, folhas e cascas de árvores na região da Planície Costeira do Rio Grande do Sul. Estas foram pesadas (1 g) e transferidas para frascos Erlenmeyer de 250 mL contendo 50 mL de meio de enriquecimento, sendo estes incubados a 28°C por 24 h. Após este período foi retirado 1 mL de cada cultivo, adicionando a 9 mL de água destilada estéril, sendo 0,1 mL inoculado em placas de Petri contendo ágar YM com auxílio de alça de Drigalski, incubando-se a 30ºC por 120 h. As colônias obtidas foram re-isoladas pelo método de esgotamento em estrias em placas de Petri contendo ágar YM, incubando-se a 30ºC por 72 h. Das 18 leveduras isoladas, 10 mostraram-se promissoras no acúmulo de lipídios utilizando-se a técnica de coloração de Sudan Black B, sendo 3 delas selecionadas para cultivo. As leveduras foram cultivadas no meio contendo (g/L): 60,9 glicerina bruta; 7,0 KH2PO4; 2,0 Na2HPO4; 1,5 MgSO4.7H2O; 0,1 CaCl2; 0,008 FeCl3.6H2O; 0,0001 ZnSO4.7H2O; 0,8 extrato de levedura; pH 5,5. Os frascos Erlenmeyer de 500mL contendo 200 mL deste meio foram mantidos em agitador orbital a 30°C e 180 rpm, acompanhando-se a cinética de crescimento celular ao longo dos cultivos. O teor de lipídios foi determinado através do método de Bligh e Dyer Os ácidos graxos foram identificados e quantificados por cromatografia gasosa (GC/FID). A identificação das leveduras foi realizada através da biologia molecular utilizando a técnica de DNA. As leveduras identificadas como Meyerozyma guilliermondii, Schwanniomyces varijiae e Cryptococcus humicola apresentaram teores de lipídios (%) de 17,94±1,08, 17,46±1,20 e 29,97±0,20 respectivamente. A levedura C. humicola, isolada a partir de uma folha, foi a que se destacou na produção de lipídios. Na análise do perfil de ácidos graxos os poli-insaturados foram os que apresentaram maiores conteúdos, destacando-se o ácido linoleico com 56,1%, 45,1% e 52,3% nas leveduras M. guilliermondii, S. varijiae e C. humicola, respectivamente. O ácido gama-linolênico, que é um ácido graxo essencial ω6, foi detectado na S. varijiae (13,6%). As leveduras silvestres apresentaram predominantemente ácidos graxos de cadeia longa, podendo ser utilizadas como matéria-prima na produção de biodiesel. Agradecimentos: CAPES, CNPq, FAPERGS.