Estudo de fatores de transcrição envolvidos em leucemia mielóide crônica

Resumo

A hipóxia é um agente estressor que, em várias linhagens celulares de origem tumoral, pode causar importantes alterações na expressão gênica levando ao bloqueio no ciclo celular, apoptose e necrose. Entretanto, em alguns tipos de células tumorais, a hipóxia pode causar alterações celulares que resultam em um fenótipo mais agressivo. O principal mecanismo molecular para regular este efeito é o fator de transcrição HIF1 alfa, que em condições de normóxia é continuamente degradado; porém, em condições de hipóxia, ele para de ser degradado, é translocado para o núcleo e ativa a transcrição de vários genes. O cloreto de cobalto (CoCl2) é um agente mimetizante das condições hipoxiais, induzindo apoptose e/ou parada no ciclo celular em diferentes tipos de células. Por outro lado, a diminuição na biodisponibilidade de ferro mediante o uso de quelantes, como a deferoxamina ou outros, produz eventos semelhantes uma vez que este é componente essencial das proteínas que transportam ou sentem a concentração de oxigênio disponível. No entanto, seus efeitos e mecanismos exatos da morte ou sobrevivência em células leucêmicas não estão claros. O gene CELF2 está envolvido numa série de processos neoplásicos, entre outras patologias, e pode ser visto como diferencialmente expresso em experimentos de transcriptômica envolvendo o tratamento de células com quelantes de ferro; porem, não se tem muito dados na literatura acerca da função deste gene. Assim, este projeto tem por objetivo estudar o sistema de regulação do gene CELF2 usando a linhagem K562 como modelo. Para tal as células foram tratadas com o mimentizante de hipóxia CoCl2, deferoxamina, curcumina e o inibidor de ABL PD180970 com três concentrações diferentes seguindo os valores de concentração comumente usados na literatura. Após tratamento avaliamos a viabilidade celular e ciclo celular por citometria de fluxo e se fez extração de RNA para avaliação da expressão gênica do gene CELF2 por PCR em tempo real. Ao mesmo tempo, a sequência promotora do gene CELF2 foi determinada por genômica comparativa e diferentes porções desta região foram clonada para ensaios celulares. Os resultados obtidos até agora demonstram que a região promotora do gene CELF2 é muito conservada evolutivamente entre os vertebrados e que as substâncias usadas para o tratamento das células K562 interferem na sua proliferação. Sendo que CoCl2 somente bloqueia o ciclo em G2, mas sem causar morte significativa e as outras três substância bloqueiam o ciclo em diferentes etapas causando a morte das células. Desta forma, podemos concluir que os tratamentos usados estão atuando na redução da proliferação e alguns deles causando morte celular; porem, será necessário alcançar todos os objetivos propostos para conhecer o papel do gene CELF2 nestes processos.