Determinação Da Concentração De Caseína Em Diferentes Amostras De Leite Através Do Método De Biureto

Resumo

Ao longo dos anos diferentes métodos espectrofotométricos vêm sendo utilizados para a determinação de proteínas totais. O método de biureto é recomendado pela Associação Americana de Análises Clínicas para a determinação de proteínas totais no leite e recebe esse nome pela estrutura que se origina da decomposição da ureia, quando esta é submetida a um temperatura de 180°C. O biureto ao reagir com íons de Cobre em meio alcalino resulta em uma solução de coloração violeta, indicando presença de proteína. No leite existem várias proteínas, sendo a principal delas a caseína, que apresenta alta qualidade nutricional e é utilizada na fabricação dos derivados do leite. Esta proteína não é facilmente alterada pelo calor, permanecendo bastante estável durante o processo de pasteurização do leite. Entretanto, quando ocorrem mudanças na acidez, há rompimento da estrutura das micelas, ocorrendo a precipitação da caseína e formação de coágulos. O objetivo do trabalho foi verificar a eficiência do método do biureto na quantificação da caseína presente em diferentes amostras de leite de vaca. Utilizaram-se 18 amostras de diferentes animais de propriedades leiteiras do município de Dom Pedrito. Para a dosagem de proteínas totais foram utilizados 100 µL das amostras de leite + 990 µL de agua destilada. Após a dosagem de proteínas totais, foi realizada a precipitação ácida da caseína nas amostras, da seguinte maneira: : 10 mL de leite + 10mL de água destilada + 2mL de ácido clorídrico a 2%, submetendo estas amostras ao processo de centrifugação durante 5 minutos a 2000rpm. Foi adicionado reagente de Biureto a todas as amostras.As amostras permaneceram em descanso durante 30 minutos e em seguida foram submetidas a leitura no espectrofotômetro, com a banda de absorção de 540nm previamente regulada, para análise de proteína total e não caseínada , respectivamente. Construiu-se uma curva utilizando solução padrão de caseína (5mg/mL) e, a partir desta, foram testadas diferentes diluições: 1,25 mg/mL; 1,87mg/mL; 2,5mg/mL e 3,125 mg/mL. Com os valores de leituras obtidos foi construído um gráfico, a partir da qual os valores obtidos de absorbância foram relacionados com a porcentagem de proteína em cada amostra analisada; sendo a menor concentração de caseína encontrada na amostra 1 (51,29%) e a maior na amostra 11 (76,40%). O valor de proteína total no leite de vaca é cerca de 3%, e destes 80% são as caseínas. As amostras analisadas apresentaram teores mais elevados de proteínas e menores de caseína do que os valores de referência, provavelmente devido a interferência de outros compostos, como por exemplo, a gordura e ao fato da possível precipitação apenas parcial da caseína, já que o ácido clorídrico foi utilizado em concentração baixa. Desta forma são necessários novos estudos para a padronização da técnica, com a utilização de detergentes para emulsificar a gordura e melhorias na precipitação ácida da caseína.