UMA VISÃO PRÁTICA DE CULTURA CELULAR PARA CÉLULAS DA LINHAGEM JURKAT

Resumo

O sistema imunológico está presente em vertebrados e invertebrados e tem como função combater ameaças bióticas e abióticas, tais como bactérias, vírus, toxinas, entre outros. A imunidade em vertebrados pode ser divida em inata e adquirida. A inata possui uma resposta ampla e rápida, enquanto a adquirida precisa de um contato prévio com o antígeno para fornecer uma resposta específica ao patógeno. A imortalização de células permitiu o desenvolvimento de pesquisas sem a necessidade de um fluxo constante de células do organismo sob estudo (cultura celular primária). Com o auxílio de ferramentas da engenharia genética ou uso de células tumorais, tornou-se possível o desenvolvimento de linhagens que evitam o envelhecimento celular e danos ao cromossomo, impedindo a senescência da cultura de células (cultura celular secundária). Por mais de 70 anos células humanas imortalizadas são usadas em pesquisas em diferentes áreas como a imunologia, farmacologia, genética e virologia. As aplicações da cultura celular nos ramos citados variam desde a produção de vacinas, aplicabilidade de biomoléculas para fármacos, estudos sobre a expressão gênica e expressão heteróloga de proteínas. As células Jurkat correspondem a uma linhagem de linfócitos T obtida há quase 50 anos a partir de um paciente com leucemia. As células T, por sua vez, são responsáveis pela imunidade celular adquirida e, por este motivo, esta linhagem pode ser usada tanto para estudos de leucemias quanto de ativação imunológica. A ativação dos linfócitos T pode ser feita in vitro através de moléculas amplamente usadas como, por exemplo, a fitohemaglutinina ou éster de forbol (PMA), usados como controles positivos em ensaios de bioprospecção de compostos com potencial para induzir a ativação celular. Para a manutenção de células Jurkat é necessário o uso do meio de cultura RPMI suplementado com 10% de soro fetal bovino e o cultivo em estufa de CO2, com 5% deste gás, a 37ºC, processos necessários para manutenção do pH do meio e o aporte de nutrientes para o crescimento da população celular. Adicionalmente, o meio pode ser complementado com o uso de antibióticos (antibacterianos e antifúngicos) como a Gentamicina e anfotericina B. Dependendo da população de células, que deve ser conferida em microscópio invertido, as células deverão ser replicadas acontecendo normalmente a cada três ou quatro dias. Para realizar a replicação celular é necessário uma cabine de fluxo laminar para realizar a manipulação das células em condições de assepsia, onde uma luz U.V deve ser ligada antes do uso por cerca de 15-20 minutos para esterilizar o ambiente de trabalho. Após o tratamento com luz ultravioleta se liga o fluxo de ar para então poder abrir a cabine introduzindo o material de trabalho como os meios de cultura e garrafas de cultura contendo as células. A cada replicação, as células são ressuspendidas por pipetagem gentil mantendo 500uL da cultura e adicionando 4,5 mL de meio completo (replicação 1:10), levando em consideração um ciclo celular de 24Hs a população celular será restabelecida entre 3 e 4 dias de cultivo. Após este processo se volta a cultura para a incubadora para que se possa crescer nos próximos dias, recomenda-se verificar as células diariamente no microscópio para garantir que não existe contaminação, em caso de contaminação deverão ser descartadas imediatamente para que não afete as outras células que estão na mesma incubadora. Com a manutenção adequada da linhagem de células Jurkat é possível realizar experimentos sem a interferência de agentes externos como contaminantes, sejam eles bactérias ou fungos que poderiam alterar os resultados finais.