EFEITO PROTETOR DE SELENOESTER VIA CHAPERONAS DA FAMÍLIA HSP-70 EM MODELO DE DOENÇA DE ALZHEIMER

Resumo

Introdução- Na Doença de Alzheimer (DA) a agregação de proteínas malformadas resultam em danos e morte neuronal. Existem mecanismos intrínsecos onde o ataque a essas células ativa um sistema de reposta biológica, visando impedir a deformidade na estabilidade proteica. As chaperonas fazem parte das proteínas de choque térmico (HSPs) e garantem a integridade da conformação proteica. A família HSP70, é conhecida pelo seu efeito neuroprotetor na DA, agindo contra a neurotoxicidade desencadeada pelos aglomerados do peptídeo beta-amilóide (Aβ), assim como na redução dos níveis e da desfosforilação da proteína tau. Selenoesteres já foram reportados pelos seus efeitos in vitro associados DA, devido a suas atividades inibitória sobre a enzima acetilcolinesterase, antioxidantes e quelante de metais. Porém o mecanismo molecular de ação desses compostos, ainda precisa ser melhor elucidado in vivo. Objetivo- Avaliar o nível de expressão de proteínas ortólogas às pertencentes à família da HSP70 a nível mitocondrial (HSP-6) e de retículo endoplasmático (HSP-4) em cepas transgênicas de Caenorhabditis elegans (C.elegans) submetidas ao tratamento agudo com compostos selenoester FA90. Metodologia- Foram utilizadas as cepas transgênicas SJ4005 [hsp-4::GFP] e SJ100 [hsp-6::GFP],ambas com a expressão das chaperonas HSP-4 e HSP-6 marcadas com proteína verde fluorescente (GFP). Realizamos o tratamento agudo dos vermes no estágio larval L1, com o composto FA90 [Ethyl 6-((4-methylbenzoylselanyl)methyl)-2-oxo-4-phenyl -1,2,3,4- tetrahydropyrimidine -5-carboxylate nas concentrações de 5µM e 200µM. Após 48 horas de tratamento, os vermes foram submetidos ao choque térmico (37°C) por 4 horas, para a indução da expressão das chaperonas. As imagens da fluorescência foram obtidas através do equipamento Floid Cell Imaging Station®, e a intensidade da mensurada através do software Image J. A análise estatística foi realizada através do teste t student, onde foram considerados resultados estatisticamente significativos aqueles com p<0.05. Resultados- Em nossos estudos prévios o composto demonstrou redução da taxa de vermes paralisados, induzida pela agregação do Aβ. Já em nas cepas SJ4005 e SJ4100 o FA90 induziu o aumento da expressão das proteínas HSP-4 e HSP-6 na maior (200µM) e menor (5µM) concentrações testadas, respectivamente, com p<0.001. Já foi observado que há o aumento das HSPs em resposta a formação de complexos insolúveis de proteínas malformadas em doenças neurodegenerativas. Essas chaperonas no RE e na mitocondria promovem a correção da síntese proteica bem como a manutenção da homeostase celular, protegendo assim as células contra potenciais danos desencadeados em reposta a esses agregados e ao estresse oxidativo. Conclusão- Em C.elegans o tratamento com o composto FA90 foi capaz de aumentar a expressão de duas chaperonas (HSP-4 e HSP-6) pertencentes a família das HSP70, indicando um possível mecanismo de proteção deste composto contra a paralisia induzida pelo Aβ.