INFLUÊNCIA DOS DIAS DE CULTIVO NO ACÚMULO LIPÍDICO, CONTAGEM CELULAR E PORCENTAGEM DE CÉLULAS APOPTÓTICAS

Resumo

A produção in vitro de embriões (PIV) é uma das biotecnologias que mais cresce atualmente, aumentando rapidamente o número de animais produzidos e ganho genético. Mesmo bem consolidada, ainda possui fatores limitantes para o desenvolvimento embrionário quando comparado com o desenvolvimento in vivo. Um desses fatores, é a quantidade lipídica aumentada em embriões PIV em relação os embriões in vivo. Esse conteúdo lipídico alterado dos embriões PIV está associado com uma reduzida sobrevivência após a criopreservação, dificultando ampla aplicação comercial desta biotecnologia. Outro fator é o número de blastomeros e células apoptóticas que estão diretamente ligadas a viabilidade e qualidade embrionária. Deste modo o objetivo deste trabalho foi avaliar o acúmulo lipídico, a contagem de blastômeros, e a porcentagem de células apoptóticas nos dia 7 (D7) e dia 8 (D8) do cultivo embrionário. Os ovários foram coletados em frigorifíco e transportados em solução fisiológica a 35ᵒC de temperatura até o laboratório, foram aspirados folículos 2mm a 8mm de diâmetro, após foram selecionados apenas oócitos grau I e II tendo citoplasma homogêneo e mais de duas camadas de células do cúmulus. Foram maturados por 24 horas em incubadora com 5% de CO2 em ar e umidade saturada. Após, foi realizado a fertilização in vitro (FIV) por 18 horas com posterior transferência para o meio de cultivo. Em seguida, foi avaliada a clivagem no dia 4 do cultivo e a coleta dos embriões no D7 e D8 do cultivo, sendo divido em amostras distintas para a avaliação do conteúdo lipídico através da coloração de Sudan Black e para análise de contagem celular e apoptose pela coloração de Túnel. Os dados foram analisados pelo test t utilizando o GLIMMIX PROC de SAS. O conteúdo lipídico dos blastocistos no D8 foi maior que os blastocistos gerados no D7 do cultivo (P<0,05). A expansão da blastocele tardia dos embriões foi crucial para o acúmulo maior no dia 8 em relação ao dia 7. Em relação a contagem de blastomeros apresentou-se uma contagem de células maior (P<0.05) no D7 (105,9 ± 6,2 vs 81,9 ± 6,1) em relação ao D8, deste modo mostrou uma melhor qualidade e viabilidade embrionária. Além disso, apresentou-se menor (P<0.05) o número de células apoptóticas no D7 (6,102 ± 1,137 vs 11,34 ± 1,438) do cultivo quando comparado com o D8, evidenciando o prejuízo para qualidade embrionária. Conclui-se que os blastocistos D7 possuem uma qualidade superior comparada aos D8.