DESENVOLVIMENTO DE METODOLOGIA ANALÍTICA PARA DETERMINAÇÃO DE CLORIDRATO DE TIROFIBANA E IMPUREZAS DE SÍNTESE

Resumo

As doenças cardiovasculares figuram entre as principais causas de mortalidade mundial, sendo responsáveis por 17,3 milhões de óbitos anuais. Uma das formas de tratamento destas doenças é através da administração de antiplaquetários. A tirofibana é um fármaco antiplaquetário que atua no final da cascata de coagulação, especificamente como antagonista dos receptores da glicoproteína IIb/IIIa, sendo o fármaco desta categoria mais utilizado mundialmente. Considerando que os fármacos utilizados no processo de produção das formulações farmacêuticas não são totalmente puros, guias regulatórios descrevem a necessidade de sua determinação e avaliação do perfil de impurezas presentes. Neste contexto, buscou-se desenvolver metodologia analítica por cromatografia líquida de alta eficiência para determinação de tirofibana e duas de suas impurezas de síntese, a impureza A e impureza C. Para o desenvolvimento da metodologia foi utilizada vazão de 1 mL/min e volume de injeção de 20 µL, diferentes colunas de fase reversa C18 e diferentes proporções de fase móvel, sendo estas compostas de uma fração aquosa de trietilamina 0,1%, acidificada com ácido fosfórico em diferentes pH (entre 3,0 e 6,0) e outra fração acetonitrílica, em proporções entre 50:50 e 90:10. A coluna C18 (250 x 4,6 mm, 5 µm) apresentou maior eficiência na separação dos compostos. Dentre as condições testadas, a utilização da fase móvel trietilamina 0,1% pH 5,5 e acetonitrila, na proporção 75:25 apresentou melhores resultados nos parâmetros de adequabilidade do sistema para o cloridrato de tirofibana, no entanto, a impureza A apresentou baixo fator de capacidade, e a impureza C, tempo de retenção excessivamente longo. Sendo assim, optou-se por eluição em gradiente com variações nas proporções de fase móvel. A condição que se apresentou adequada foi trietilamina 0,1% pH 5,5 e acetonitrila 78:22 entre 0,0 e 2,5 minutos, passando para 75:25 até os 6,0 minutos, 65:35 até os 17,0 minutos e retornando à proporção inicial dos 17 aos 20 minutos. Na avaliação da performance do sistema cromatográfico foi possível verificar que o pico do fármaco e das impurezas apresentaram simetria (próximo a 1), resolução (> 2) e elevado número de pratos teóricos (> 2000), conforme preconizado na literatura. O perfil cromatográfico desenvolvido mostrou-se adequado para análise de cloridrato de tirofibana, na presença das impurezas A e C, com parâmetros de adequabilidade do sistema satisfatórios. Os resultados obtidos para o método desenvolvido apresentam ótimas perspectivas para o emprego no controle de qualidade de rotina do fármaco.