ATIVIDADE ANTIBIOFILME DA CUMARINA FRENTE À PSEUDOMONAS AERUGINOSA

Resumo

A utilização desregrada de fármacos antimicrobianos desencadeou o aumento de cepas resistentes aos tratamentos. Este cenário se torna mais preocupante quando os microrganismos se apresentam na forma de biofilme. Os biofilmes são estruturas complexas de aglomerados microbianos, protegidos por uma camada de exopolissacarídeos (EPS) que impede a penetração dos fármacos, dificultando ainda mais o tratamento das infeções. Com isso, o emprego de plantas medicinais como alternativa de tratamento antimicrobiano está crescendo no mercado farmacêutico, pois estas possuem metabolitos secundários, que são os principais responsáveis pelas atividades biológicas das plantas. Tendo em vista os metabólitos secundários como fonte de pesquisa, em nosso estudo, destacamos a classe das cumarinas, que são compostos fenólicos presentes em uma vasta diversidade de vegetais e possui relatos de atividades antimicrobiana, antioxidante e antiviral. Sua estrutura química consiste em um anel aromático 1,2 benzopironas e um benzeno fundido ao anel de α-pirona. Diante disso, este estudo tem por objetivo avaliar a atividade antibiofilme da cumarina frente a biofilme formado por P. aeruginosa (PA01). A cepa de PA01 foi inoculada em 5mL de caldo Muller Hinton e crescida até a fase estacionária. Utilizou-se uma placa de 96 poços estéril, contendo controle positivos com meio de cultura e a PA01, e controle negativo só com o meio de cultura. A seguir, o inoculo foi diluído 1: 100 em Muller Hinton e pipetados 100µl de cada diluição para os poços de fundo plano e tratados com concentrações subinibitórias da cumarina. Após incubação por 24h a 37°C os microrganismos planctônicos foram removidos e lavados com água destilada. A revelação do biofilme foi realizada utilizando 200 µL de solução violeta de cristal a 0,1% (Sigma Chemical®) em cada poço. As microplacas foram lavadas com água destilada e secas ao ar. Para solubilizar o biofilme, foram adicionados 200 µL de etanol a 95%. A solução foi transferida para uma nova placa e a formação do biofilme foi revelada medindo a absorbância a 570 nm num leitor de microplacas. Logo após foi realizada a contagem de sésseis. Os resultados observados demonstraram que a cumarina é capaz de inibir a formação do biofilme em até 78% e reduzir a contagem de colônias sésseis. Conforme esses resultados a cumarina apresenta significativamente atividade antibiofilme, com isso sugerimos que está substância pode ser utilizada como alternativa de tratamento para infecções que envolvem a formação de biofilmes.